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薄层层析硅胶板制作和操作方法

文章来源:本站人气:3302发表时间:2016-07-22

  薄层层析硅胶板就是我们通常所说的硅胶板要了解薄层层析硅胶板制作与操作方法必须先知道:薄层层析(TLC)的原理;薄层层析法是一种微量而快速的分析方法,操作容易,设备要求低,但对于每一种被分离的物质都需要各自独立的方法,TLC主要应用于氨基酸、多肽、糖脂、核苷酸和生物碱类多种物质的分离和鉴定。其主要原理为根据样品组分与吸附剂的吸附力及其在展层溶剂中的分配系数的不同而使混合物分离。

薄层层析硅胶板

  薄层层析硅胶板操作方法

  a. 硅胶板于100℃烘箱活化30 min; 冷却后,在距底端2cm 处划直线,用铅笔轻轻标出点样位置,两个点样点一般距离1-1.5 cm;

  b. 点样,每次点样量一般为0.8 μL(视情况而定),点样点要尽量小,如需加量,待点样点干燥后再在同一点上第二次、第三次点样。每次点样都要在上次点样点干燥后进行,避免点样点过度扩散影响实验结果;

  c. 室温干燥后,快速将点好样的硅胶板放入已提前加入展开剂的层析缸,密封层析缸,开始展层;

  d. 待展层剂上沿距离硅胶板上部边缘2 cm时取出硅胶板,室温风干后于50℃烘箱烘干5 min,取出,待硅胶板冷却后放入层析缸进行第二次展层;推荐产品:发泡硅胶板

  e. 展层完毕后室温干燥并选择合适的显色方法进行显色并计算其Rf值。

  显色方法:薄层色谱的显色方法有很多,一些通用的显色方法如下:紫外照射法、荧光试剂法及紫外照射法等;但根据待测物的不同要选择合适的显色方法。

  以上就是薄层层析硅胶板制作和操作方法仅供参考,瑞博橡胶提醒你:在操作或实验的时候应该注意一下几点。

  1.样品的溶解:将样品溶于展开剂极性相近、挥发性高的有机溶剂。

  2.点样:控制上样量,点样基线距底边2.0 cm,控制样点直径(5 mm)及点间距离(1-1.5 cm),避免因扩散而影响检测(下图),点样时必须注意勿损伤薄层表面。

  3. 展层:展层容器必须密封,提前加入展开溶剂,使溶剂蒸气达到平衡。展开剂不能高于上样点,否则,无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。

  4. 展开剂的选择条件:有良好的溶解性、使待分离组分间分开、待测组分的Rf值在0.2~0.8之间、不与待测组分或吸附剂发生化学反应、沸点适中,黏度较小、展开后组分斑点圆且集中、混合溶剂最好用新鲜配制。

  5. 边缘效应:边缘效应是样品在层析时,薄层板两边的斑点比中间斑点移动快,并向两边偏斜。其原因是用混合溶剂展开时,极性较弱和沸点较低的溶剂在薄层板两边沿处较易挥发,使薄层板上的展开剂比例不一,而出现边缘效应,解决边缘效应最有效的方法是剪去薄层板浸入展开剂一端的两角。

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